水果蔬菜中

　　农药及其代谢物残留量如何测定

　　今天给大家介绍

　　液相色谱-串联质谱和气相色谱-串联质谱法

　　帮您测定水果蔬菜中

　　68种农药及其代谢物残留量

　　1 前言

　　此方法由中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所研发，主要针对现目前国家农产品质量安全例行监测涉及的68种农药及其代谢物。

　　此方法较2018年例行监测参数增加了环丙氨嗪、甲霜灵、霜霉威、多效唑、氯吡脲、氯虫苯甲酰胺、虫酰肼、吡唑醚菌酯、氯菊酯、醚菊酯10种农药，样品处理操作更简便、分析效率更高，能够快速分析测定水果蔬菜样品中的农药及其代谢物残留，对于分析发现的阳性样品则可以按要求用标准方法做二次定量确证。同时增加了附带QUICLEAR多功能针式过滤器和平行研磨仪使用方法的视频，方便用户高效快速的完成样品粉碎制备及提取净化前处理。

　　2 范围

　　此方法适用于水果蔬菜中68种农药及其11种代谢物残留量的液相色谱-串联质谱和气相色谱-串联质谱快速测定。

　　此方法对68种农药及其11种代谢物的回收率为60-120%，定量限为1-10ug/kg。

　　3 方法原理

　　用1%乙酸乙腈或乙腈提取，基于QuEChERS的多功能针式过滤器（MFF）快速净化，液相色谱-串联质谱结合气相色谱-串联质谱测定，采用基质匹配标样以外标法定量。

　　4 试剂与材料

　　4.1 乙腈：99.9%，色谱纯。

　　4.2 甲醇：色谱纯。

　　4.3 乙酸：>99.5%，分析纯。

　　4.4 甲酸铵：色谱纯。

　　4.5 氯化钠：≥99.5%，分析纯。

　　4.6 提取盐包：QUICLEAR前处理产品

　　AOAC方法：内含6g无水硫酸镁，1.5g乙酸钠。

　　EN方法：内含4g无水硫酸镁、1g氯化钠、1g柠檬酸三钠二水合物、0.5g柠檬酸二钠倍半水合物。

　　4.7 1%乙酸乙腈溶液：取5mL乙酸(4.3)，用乙腈(4.1)稀释至500mL。

　　4.8 5mM甲酸铵甲醇溶液：称取157.65mg甲酸铵(4.4)，用甲醇(4.2)溶解至500mL。

　　4.9 5mM甲酸铵水溶液：称取157.65mg甲酸铵(4.4)，用水溶解至500mL。

　　4.10 农药及代谢物混合标准溶液：56种LC-MS/MS检测农药混合标准溶液，23种GC-MS/MS检测农药混合标准溶液，浓度均为100.0mg/L，-20℃以下保存。

　　4.11 混合标准工作溶液：精密量取100.0mg/L的56种和23种农药及代谢物混合标准溶液(4.10)，用乙腈(4.1)分别稀释至10mg/L。

　　5 仪器和设备

　　5.1 液相色谱－串联质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）

　　5.2 气相色谱－串联质谱仪：配有电子轰击电离源（EI）

　　5.3 天平：感量0.01g。

　　5.4 分析天平：感量0.00001g。

　　5.5 涡旋仪。

　　5.6 离心机：>转速4000r/min。

　　5.7 一次性注射器：2mL。

　　5.8 多功能针式过滤器：

　　AOAC方法：

　　内含150mgMgSO4、50mgPSA、50mgC18的净化吸附剂，滤膜孔径0.22μm。（产品号：F-QuEChERS-AOAC3202）。

　　EN方法：

　　内含150mgMgSO4、25mgPSA、25mgC18的净化吸附剂，滤膜孔径0.22μm。（产品号：F-QuEChERS-EN3102）。

　　6 采样和试样制备

　　参照相关标准方法用粉碎研磨仪将水果蔬菜样品均质制备（参考QUICLEARE0301平行研磨仪）。

　　7 分析步骤

　　7.1样品前处理

　　7.1.1方法1（AOAC方法）

　　准确称取15g（精确至0.01g）均质样品于50mL离心管中，加入15mL 1%乙酸乙腈（4.7），加入提取包P-QuEChERS-AOAC1202（4.6）后剧烈振摇1min，4000r/min离心5min。用一次性注射器（5.7）取1mL上清液（再吸入1mL空气），匀速通过多功能针式过滤器F-QuEChERS-AOAC3202（5.8）至进样小瓶中（使液体逐滴流出），上机测定。

　　1) 常规水果蔬菜：

　　采用F-QuEChERS-AOAC3201，内含150mgMgSO4、50mgPSA；

　　2) 含色素的水果蔬菜：

　　采用F-QuEChERS-AOAC3206，内含150mgMgSO4、50mgPSA、5mgGCB；

　　3) 含脂肪和蜡质的水果蔬菜：

　　采用F-QuEChERS-AOAC3202，内含150mgMgSO4、50mgPSA、50mgC18；

　　4)含色素和脂肪的水果蔬菜：

　　采用F-QuEChERS-AOAC3203，内含150mgMgSO4、50mgPSA、50mgC18、5mgGCB。

　　7.1.2方法2（EN方法）

　　准确称取10g（精确至0.01g）均质样品于50mL离心管中，加入10mL乙腈（4.1），加入提取包P-QuEChERS-EN1101（4.6）后剧烈振摇1min，4000r/min离心5min。用一次性注射器（5.7）取1mL上清液（再吸入1mL空气），匀速通过多功能针式过滤器F-QuEChERS-EN3102（5.8）至进样小瓶中（使液体逐滴流出），上机测定。

　　1）常规水果蔬菜：

　　采用F-QuEChERS-EN3101，内含150mgMgSO4、25mgPSA；

　　2）含色素的水果蔬菜：

　　采用F-QuEChERS-EN3106，内含150mgMgSO4、25mgPSA、5mgGCB；

　　3）含脂肪和蜡质的水果蔬菜：

　　采用F-QuEChERS-EN3102，内含150mgMgSO4、25mgPSA、25mgC18；

　　4）含色素和脂肪的水果蔬菜：

　　采用F-QuEChERS-EN3103，内含150mgMgSO4、25mgPSA、25mgC18、5mgGCB。

　　7.2标准曲线绘制

　　取空白试样按7.1处理方法制备空白基质溶液，然后准确量取适量56种和23种农药及其代谢物混合标准工作溶液（4.11），用空白基质溶液稀释配制成浓度为1μg/L、2μg/L、5μg/L、10μg/L、25μg/L、50μg/L、100μg/L、200μg/L的系列基质匹配标准工作溶液，供液相色谱-串联质谱和气相色谱-串联质谱测定。分别以68种农药及其代谢物的定量离子质量色谱峰面积为纵坐标，对应的基质匹配标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线，求回归方程和相关系数。

　　7.3测定

　　7.3.1液相色谱-串联质谱参考条件

　　液相色谱参考条件

　　a）色谱柱：XDB C182.1×150mm，3.5μm，或性能相当者；

　　b）流速：0.4mL/min；

　　c）流动相：A为5mM甲酸铵水溶液，B为5mM甲酸铵甲醇溶液

　　d）进样量：10μL；

　　流动相梯度洗脱程序见表1：

　　质谱参考条件

　　a）离子源：电喷雾离子源（ESI）；

　　b）扫描方式：正、负离子扫描；

　　c）质谱扫描方式：多反应离子监测（MRM）

　　d）离子源温度：550℃；

　　e）离子源喷雾电压：5500V；

　　f）气帘气：30psi；

　　g）雾化气：60psi；

　　h）干燥气：60psi；

　　i）碰撞气：8psi；

　　参考监测离子参数情况见表2。

　　表2：56种化合物MRM特征离子参考质谱条件

　　7.3.2气相色谱-串联质谱参考条件

　　气相色谱参考条件

　　a）色谱柱：HP-5MSUI 30×0.25×0.25mm

　　b）流速：1.0mL/min

　　c）进样口温度：280℃

　　d）升温程序：80℃（1min），40℃/min至200℃，5℃/min至240℃，12℃/min至320℃(5min)

　　e）传输线温度：280℃

　　f）离子源温度：280℃

　　参考监测离子参数情况见表

　　表3：23种化合物GC-MS/MS参数及保留时间

　　此方法中所有的前处理耗材

　　和标准品均由天津阿尔塔科技有限公司提供！